于月仙是内蒙古赤峰人，用她自己的话说就是“生长在赤峰、工作在天津、生活在北京”。曾就读于赤峰第一职业中专的她中专毕业后成了当地的一名老师。1992年，于月仙费尽周折考取了中央戏剧学院。
2002年，拍摄潘镜丞执导的国产警匪剧《生命的祭坛》，并与雷明、周继伟合作出演；2月15日，参演的《西游记后传》播出 。2004年，拍摄乡村作品《走进石锁沟》，饰演路璐。 于月仙 2005年8月，主演了乡村生活作品《黄河浪》；10月，参与了生活喜剧作品《马大帅3》的拍摄，饰演范德彪的房东刘佩云 。 2006年，拍摄了农村爱情轻喜剧，是“乡村爱情”系列剧的第一部《乡村爱情》，诠释了长贵妻子，大脚超市老板娘谢大脚一角。 2007年，拍摄了农村爱情轻喜剧，是“乡村爱情”系列剧的第二部《乡村爱情2》；随后，主演了反映新旧观念交织下西部农村状态的《月儿弯弯》，饰演西部乡村姑娘 。 2008年2月，主演了“北域丝绸之路”张库大道兴盛史的作品《大境门》，成为了阴狠毒辣的风尘女“十三响 ”；7月，与赵本山、刘流共同拍摄了民国题材作品《关东大先生》，在剧中扮演全聚德烤鸭店的老板娘叶丽莎一角 ；10月，主演了反映“四在农家”新农村建设的长篇电视连续剧《青山绿水红日子》，于月仙在本剧中变身为一名既爱民又爱家的人民女警察 ；随后，拍摄了黄力加执导的家庭伦理剧《人活一张脸》，在片中饰演赵剃头的老婆“唐快嘴” 。 于月仙舞台演出照 2009年12月，主演了大型古装笑话电视连续剧《老爷升堂》，饰演了一位为爱痴狂的富家小姐张曼钰 ；随后，拍摄农村题材电视剧，是“乡村爱情”系列剧的第三部《乡村爱情故事》 。 2010年3月，拍摄了演绎三姐妹及其家人之间亲情的作品《外姓兄弟》，饰演杜家三女儿，江汉平的妻子杜美霞，并与范明合作此剧 ；5月，主演了全国首部电视相声系列剧《我是大侦探》，饰演翡翠楼的老板娘甄翡翠 ；11月，参演了安七炫、谢娜主演的花箐执导的首部家庭题材电视剧《辣椒与泡菜》，饰演猜猜母亲，天香食府的老板娘黄鲜花；随后，拍摄了农村题材电视剧，是“乡村爱情”系列剧的第四部作品《乡村爱情交响曲》 ；11月17日，凭借《乡村爱情》谢大脚这一角色，获得华鼎奖乡村题材类最佳女演员奖项 。 2011年4月，参与了傅百良执导的乡村生活轻喜剧《火红的日子》的拍摄，饰演烧饼铺老板武开河的表妹的女儿王鲜花 ；7月，主演赵本山执导的首部都市电视剧《E网情》，饰演董莉清 ；随后，获得第六届华鼎奖老百姓最喜爱十佳电视明星奖项 。 2012年1月，拍摄了“乡村爱情”系列的第五部《乡村爱情小夜曲》 ；5月，主演傅百良执导的都市轻喜剧《不是钱的事》，诠释了银岭市民间艺术团二队副队长于戴宁一角；10月，主演赵本山执导的“乡村爱情”系列剧的第六部《乡村爱情变奏曲》 。 2013年8月，主演刘流执导的农村题材作品，是“乡村爱情”系列剧的第七部《乡村爱情圆舞曲》 ；9月，与沈春阳、宋小宝、关婷娜共同主演都市爱情励志剧《男人四十要出嫁》，饰演大嫂慧芳 。 2014年7月，主演孟令宇执导的《乡村爱情浪漫曲》，也是“乡村爱情”系列剧的第八部 。 2015年，参演电视剧《大嫁风尚》，饰演顾小曼 。 2016年3月，参加由深圳卫视与英国WPP集团共同研发，深圳卫视独立制作的都市人快乐减压游戏竞技节目《疯狂的丛林》 ；7月，执导并主演了儿童电影《我的无色世界》，戏中她扮演一个蒙古族孩子的妈妈 ；9月，拍摄《乡村爱情》系列电视剧之《乡村爱情9》 ；10月，于月仙凭借在微电影《草原母亲》中的出色演技，获得了最佳女演员奖 。11月7日，于月仙参加以“新时代之梦”为主题的第五届亚洲微电影艺术节“金海棠奖”颁奖典礼，并获得公益人物奖 。